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科研相機成像品質的關鍵Vol.2—雜訊(上)

上期我們介紹了科研相機圖像品質的關鍵因素:收光、雜訊、均勻度、校正,並針對收光做了更進一步的解釋,接下來我們將分成兩期深入介紹「雜訊」。

雜訊的影響

信噪比(SNR)高低代表測量的品質,在科研相機的成像中,信噪比指信號的相對幅度與該信號中每個像素的不確定性相比,也就是信號與噪聲的比值,在需要精確測量光的應用中,高信噪比尤其重要。

信噪比

信噪比 (SNR)就是信號除以三個主要雜訊源的總和(光子散粒雜訊、暗電流和讀取雜訊)公式計算如下:

高信噪比表示圖像沒有因雜訊引起失真和偽影,信噪比越高,代表信號越突出、圖像品質越好,越容易實現預期的結果;此外許多定量分析技術都有一個信噪比閾值,低於這個閾值的表現就會很差,而理想的信噪比通常取決於樣品、分析技術和應用需求,並無一個固定的數值,下圖展示了不同信噪比對應的圖像品質。

螢光顯微鏡中的信噪比比較,樣品:肌動蛋白標記的BPAE固定樣品載玻片
根據圖片樣品最亮點周圍 3x3 像素區域的平均信號響應計算信噪比,第二列圖像為橘框區域的放大影像

小結:信噪比(SNR)是衡量圖像品質的一個重要量化指標,包括相機的信號收集和雜訊性能,但未考慮圖樣和偽影。

光子散粒雜訊

光子散粒雜訊是指一系列光子源(包含螢光)發射光子的隨機性,其分布平均值則是遵從卜瓦松分布,一種統計與機率學裡常見到的離散機率分布。

每次測量中,信號 𝑆都會以 √ 𝑆的方式變化,因此這是一個隨信號增長而增長的雜訊源,所以在高信號電平下,主要是光子散粒雜訊。 

讀取雜訊

讀取雜訊是在相機中測量檢測到的信號的不確定性,受讀出速度和電子設計質量影響,CCD的相機感光元件具有高讀取雜訊(6至10個電子),工業CMOS相機也具有4至10或多達50個電子雜訊,科研CMOS相機通常只具有大約1.0至1.6電子的讀取雜訊。高讀取雜訊會降低昏暗信號的圖像品質,是弱光成像的一大挑戰。

量子效率和讀取雜訊的重要性高低,是科研成像中常見的問題之一,下圖對此進行了更進一步的探討。將具有0.7e-讀取雜訊但只有80%QE的相機,與具有1.0e-讀取雜訊和95%QE的相機進行比較,較高的QE相機在所有信號電平高於每像素1個光子時,都獲得了更高的信噪比,例如弱螢光顯微鏡中,信號範圍通常為每像素10 至100個光電子,即使將較高QE相機的讀取雜訊增加到1.6e-,也能為10個光電子以上的信號提供更好的SNR,信號如此低的狀況下,導致大多數成像應用會遠超這個值。 

然而將95%QE相機的讀取雜訊從1.0e-降低到0.7e-時,對信號幾乎不造成影響,在10個光子時使SNR增加2%,在100個光子時使SNR增加0.2%。

假設暗電流忽略不計, 在不同量子效率(QE)和讀取雜訊(r.n.)下,計算出的信噪比與入射信號的比較。左圖:信噪比;右圖:相對信噪比(rSNR)與具有100%QE且無讀取雜訊的「完美」理論相機相比。

小結:讀取雜訊是弱光成像的一個重要因素,但微小的差異僅影響極端弱光條件下的成像,相較來說量子效率有的影響更大

背景光

讀取雜訊在圖像品質中的作用,一定程度上取決於樣品中是否存在背景光,例如離焦螢光、自發螢光、室內光和漏光,由於背景光也會表現出光子散粒雜訊,每個像素只有 2~3 個光電子的冗餘信號,對測量產生的雜訊已超過了 CMOS 相機的典型讀取雜訊,使得相機之間的讀取雜訊差異在這些設置中已不是重點。